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CD47 / SIRPα Hub — Macrophage Checkpoint Discovery ToolsDRAFT
CD47 / SIRPα Hub — Macrophage Checkpoint Discovery Tools
> 发布版（三节：biology / assay_design / faq）。完整版（protocols / product_comparison / construct_selection）在数据验证后补充。
1. Biology
CD47（"don't eat me"信号）广泛表达——包括红细胞——通过结合巨噬细胞上的 SIRPα（CD172a）抑制吞噬。肿瘤细胞上调 CD47 逃避免疫监视；抗 CD47 / 抗 SIRPα 阻断恢复吞噬，是活跃的临床策略。该相互作用亲和力低（文献报道 µM 级）、动力学快——与高亲和检查点配对（如 TIGIT-CD155）完全不同，实验设计必须区别对待。
- 信号：CD47 → SIRPα → 抑制吞噬（巨噬细胞）
- 陷阱：红细胞高表达 CD47（背景/吸附）；低亲和快动力学（SPR 易伪影）；SIRPα V1/V2 异型
- 相关分子：SIRPα V1/V2、CD47 IgV、CD172a
UniProt 增强（DRAFT · 待审校）
- CD47（[Q08722](https://www.uniprot.org/uniprotkb/Q08722)，UniProt CC BY 4.0）：长度 323 aa；链/成熟区起点 -；功能：Adhesive protein that mediates cell-to-cell interactions (PubMed:11509594, PubMed:15383453). Acts as a receptor for thrombospondin THBS1 and as modulator of integrin signaling through the activation o…
- SIRPA（[P78324](https://www.uniprot.org/uniprotkb/P78324)，UniProt CC BY 4.0）：长度 504 aa；链/成熟区起点 -；功能：Immunoglobulin-like cell surface receptor for CD47. Acts as docking protein and induces translocation of PTPN6, PTPN11 and other binding partners from the cytosol to the plasma membrane. Supports adhe…
2. Assay Design
| 环节 | 要点 |
|---|---|
| 结合 | 低密度 SPR/BLI（Rmax ≤20 RU）、高流速；报告 KD + kon/koff |
| 阻断 | 竞争 SPR（CD47 + anti-CD47 → SIRPα）与/或细胞吞噬 assay |
| 红细胞 | 细胞实验彻底清洗效应细胞；CD47 阴性对照证明特异性 |
| 对照 | CD47 阴性细胞、isotype、SIRPα 阻断阳性对照 |
| 异型 | 明确 SIRPα V1/V2——临床相关程序需确认抗体是否双阻断 |
详细方案见：[CD47/SIRPα 阻断实验三大陷阱](/content/cd47-sirpa-blocking)
3. Construct Selection（CD47 / SIRPα）
3.1 关键构建参数
| 参数 | 选项 | 影响 | 怎么选 |
|---|---|---|---|
| CD47 形式 | IgV 域 / 全长 ECD | IgV 是结合域；全长 ECD 更接近天然 | 结合研究 ECD；表位研究 IgV 对照 |
| SIRPα variant | V1 / V2（及其他） | 对 CD47 亲和力不同（文献报道），人群分布不同 | 明确 allotype；临床相关 → 双 variant |
| 单体性 | 单体 ECD（禁用 Fc-fusion） | µM 级低亲和力 + 亲合性 = 灾难 | 只选单体 ECD（SEC 确认） |
| 标签 | biotinylated / His | 捕获与洗脱 | 动力学 → biotinylated |
| 配对同源性 | 同一供应商 | 亲和力差 2× 就影响阻断结论 | 同源采购 |
3.2 决策树（填空式）
- 用途 = {{结合动力学 / 阻断机制 / 细胞吞噬}}？
- 动力学？→ 单体 ECD，Rmax ≤20 RU，biotinylated 捕获
- 临床相关？→ 确认 SIRPα V1 与 V2 双阻断
- 阻断？→ 竞争 SPR + 吞噬 assay 双证据
3.3 供应商必须提供的证据
- [ ] 单体状态（SEC）
- [ ] 与配对蛋白的 SPR KD（µM 级属正常）
- [ ] SIRPα allotype 声明（V1/V2）
4. Product Comparison（配对）
4.1 格式对比
| 版本 | 适用 | 局限 | 推荐度 |
|---|---|---|---|
| 单体 biotinylated 配对 | SPR/BLI 动力学 + 阻断 | 需验证捕获活性 | ★★★★★ |
| His-tag 单体 | 常规结合/ELISA | anti-His 批次差异 | ★★★★ |
| Fc-fusion 任一 | 细胞实验 | 动力学禁用（亲合性假 nM） | ★★ |
4.2 与常见替代方案对比（已核实公开数据预填，价格与最新目录 M4 待复核）
| 维度 | 本平台（计划） | Sino (CD47 12283-H27H-B) | ACRO (SIRPα V8) | 差异点 |
|---|---|---|---|---|
| 单体性数据 | 承诺 SEC 确认 | CD47 biotinylated HPLC 验证（公开目录） | SIRPα V8 MALS 验证（Fisher 在售，公开） | 单体性双确认是关键 |
| V1 allotype | 承诺 | 需询价确认 | V8 为主，V1 待确认 | V1 是内容 Hub 承诺缺口 |
| 价格 | 待定 | 待询（M4） | 待询（M4） | — |
4.3 我的推荐（一句话）
> CD47–SIRPα 动力学/阻断研究 → 单体 biotinylated 配对（SEC 确认 + V1 allotype 明确），因为低亲和力体系下单体性是数据可信度的前提。
6. FAQ
- Q: 为什么我的 KD 看着是 nM 但细胞实验不work？ 低亲和相互作用 + 高密度表面 → 亲合性伪影；检查密度与 SEC 单体状态。
- Q: 红细胞干扰怎么破？ 纯化蛋白做结合实验；细胞实验彻底清洗 + 对照。
- Q: SIRPα V1 和 V2 有什么区别？ 对 CD47 亲和力不同（文献报道），人群分布不同——试剂必须标注 allotype。
- Q: 我需要什么 QC 数据？ SEC 单体%、内毒素、与配对蛋白的 SPR KD、allotype 声明。
- Q: 阻断 assay 用哪个 readout？ 竞争 SPR 证明机制 + 细胞吞噬证明功能，两者都要。
5. Protocols
- [CD47–SIRPα SPR 结合与抗体阻断协议](/content/cd47-sirpa-spr-blocking)（文献依据·待湿实验验证）
What next?
- [Buy CD47/SIRPα Matched Pair](/request?utm_campaign=hub-cd47-sirpa&utm_source=site&utm_medium=organic&utm_content=cta-buy) — 单体 ECD，SPR 数据
- [Request a Sample](/request?utm_campaign=hub-cd47-sirpa&utm_source=site&utm_medium=organic&utm_content=cta-sample)
- [Discuss Your Experiment](/request?utm_campaign=hub-cd47-sirpa&utm_source=site&utm_medium=organic&utm_content=cta-discuss) — 红细胞干扰与阻断设计支持
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