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CD47 / SIRPα Hub — 巨噬细胞检查点发现工具DRAFT
CD47 / SIRPα Hub — 巨噬细胞检查点发现工具
> 发布版（六节完整版）。
1. Biology
CD47（"don't eat me"信号）广泛表达——包括红细胞——通过结合巨噬细胞上的 SIRPα（CD172a）抑制吞噬。肿瘤上调 CD47 逃避免疫监视；抗 CD47 / 抗 SIRPα 阻断恢复吞噬。该相互作用亲和力低（文献报道 µM 级）、动力学快——与高亲和配对完全不同，实验设计必须区别对待。
- 陷阱：红细胞高表达 CD47；低亲和快动力学（SPR 易伪影）；SIRPα V1/V2 异型
- 相关：SIRPα V1/V2、CD47 IgV、CD172a
UniProt 增强（待审校）：CD47（Q08722，323 aa）；SIRPA（P78324，504 aa） —— 详见 EN Hub（UniProt CC BY 4.0）。
2. Assay Design
| 环节 | 要点 |
|---|---|
| 结合 | 低密度 SPR/BLI（Rmax ≤20 RU）、高流速；报告 KD + kon/koff |
| 阻断 | 竞争 SPR（CD47 + anti-CD47 → SIRPα）与/或细胞吞噬 |
| 红细胞 | 细胞实验彻底清洗；CD47 阴性对照 |
| 异型 | 明确 SIRPα V1/V2——临床相关确认双阻断 |
详细方案：[CD47/SIRPα 阻断三大陷阱](/content/cd47-sirpa-blocking)
3. Construct Selection（CD47/SIRPα）
| 参数 | 选项 | 怎么选 |
|---|---|---|
| CD47 形式 | IgV / 全长 ECD | 结合研究 ECD；表位 IgV 对照 |
| SIRPα variant | V1 / V2 | 明确 allotype；临床相关 → 双 variant |
| 单体性 | 单体 ECD（禁 Fc-fusion） | 只选单体 ECD（SEC 确认） |
| 配对同源性 | 同一供应商 | 同源采购 |
供应商证据：SEC 单体状态、与配对蛋白的 SPR KD（µM 级正常）、SIRPα allotype 声明。
4. Product Comparison（配对）
| 版本 | 适用 | 局限 | 推荐度 |
|---|---|---|---|
| 单体 biotinylated 配对 | SPR/BLI 动力学 + 阻断 | 需验证捕获活性 | ★★★★★ |
| His-tag 单体 | 常规结合/ELISA | anti-His 批次差异 | ★★★★ |
| Fc-fusion 任一 | 细胞实验 | 动力学禁用（假 nM） | ★★ |
4.2 竞品对比（预填，M4 待复核）：Sino CD47 12283-H27H-B biotinylated HPLC 验证；ACRO SIRPα V8 MALS 验证（V1 待确认）——价格待询。
5. Protocols
- [CD47–SIRPα SPR 结合与阻断协议](/content/cd47-sirpa-spr-blocking)（文献依据·待验证）
6. FAQ
- 为什么 KD 看着是 nM 但细胞实验不 work？ 低亲和 + 高密度 → 亲合性伪影；查密度与 SEC。
- 红细胞干扰怎么破？ 纯化蛋白做结合；细胞实验彻底清洗 + 对照。
- SIRPα V1 和 V2 区别？ 对 CD47 亲和力不同（文献）、人群分布不同——必须标注。
下一步
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