Technical Note ◆ tigit-pair-guide
TIGIT/CD155 配对：BLI 与 SPR 的工作流与优化PUBLISHED
TIGIT/CD155 配对：BLI 与 SPR 的工作流与优化
核心结论
同源、预验证的 TIGIT–CD155 配对消除了检查点筛选中最大的变量——试剂不一致。低密度捕获一方、流式注入另一方，信任数据前必须做 DNAM-1（CD226）交叉竞争对照。
1. 机制（一分钟版）
TIGIT 是 T/NK 细胞上的抑制性检查点，主要配体 CD155/PVR（文献报道低 nM 级亲和力），次级配体 CD112。关键：CD155 同时结合激活受体 DNAM-1（CD226）——TIGIT 与 DNAM-1 竞争同一配体。任何抗体筛选都需验证过的配对来区分"靶点结合"与"交叉竞争"。
2. 为什么"配对"比"两个蛋白"重要
- 同源同批哲学——跨供应商混用把表达系统/糖基化差异混进排名；
- 预验证结合数据——配对随附 SPR/BLI 传感图（KD/kon/koff），你的结果才有基准；
- 交叉反应对照——完整配对含 CD155–DNAM-1 数据，可设计竞争实验。
3. 实验设计（BLI/SPR）
| 步骤 | 建议 | 原因 |
|---|---|---|
| 捕获 | biotinylated TIGIT（低密度） | TIGIT 单体——低密度保持动力学干净 |
| 分析物 | CD155 ECD（或反向） | 方向一致贯穿整个筛选 |
| 密度 | 低（Rmax 20–50 RU） | 防再结合/亲合性虚高 |
| 再生 | 温和（glycine pH 2.5–3.0 短脉冲） | 高亲和配对，剧烈再生毁表面 |
| 竞争 | CD155 预孵育抗体后注入 | 确认阻断；与 DNAM-1 竞争对照比较 |
数值核查：文献报道 TIGIT–CD155 KD 为低 nM 级；若你的测定与 datasheet 差 10 倍以上，先查密度与缓冲液，别怀疑蛋白。
4. 常见错误
- 二聚伪影——CD155 可能寡聚；动力学前确认 COA 的 SEC 状态；
- 跳过 DNAM-1 对照——只阻断 TIGIT 不阻断 DNAM-1 的抗体生物学不同；两个都做；
- 筛选中途换供应商——中途换 CD155 批次毁掉排名；配对按单元采购；
- 再生未验证——做筛选前先验证 ≥5 个再生循环活性稳定。
5. 向供应商要求什么
- 配对 + 双向 SPR/BLI KD 数据；
- CD155 SEC 状态（单体/二聚）+ 内毒素；
- biotinylated TIGIT（捕获格式）；
- 可选：CD155–DNAM-1 竞争数据。
6. 相关资源
- [TIGIT & CD155 配对产品](/pairs/tigit-cd155)
- [TIGIT–CD155 BLI 结合与竞争协议](/content/tigit-cd155-bli)
- [CD155 与 DNAM-1 交叉竞争专题](/content/cd155-dnam1-competition)
下一步
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