Technical Note ◆ cd47-sirpa-blocking
CD47/SIRPα 阻断实验设计：避开三大陷阱PUBLISHED
CD47/SIRPα 阻断实验设计：避开三大陷阱
核心结论
CD47–SIRPα 是低亲和（文献报道 µM 级）、快动力学的相互作用——容易测错也容易过度阻断。三大陷阱：红细胞问题（RBC 满载 CD47）、SPR 亲合性伪影、SIRPα V1/V2 异型。绕开它们，你的阻断实验才真正预测吞噬。
1. 机制（一分钟版）
CD47（"don't eat me"信号）广泛表达——包括红细胞——结合巨噬细胞 SIRPα（CD172a）抑制吞噬。肿瘤上调 CD47 逃避免疫监视；抗 CD47/抗 SIRPα 阻断恢复吞噬。注意：低亲和快动力学——与 TIGIT–CD155 这类高亲和配对完全不同，实验设计必须区别对待。
2. 陷阱一：红细胞问题
RBC 高表达 CD47，任何含血制品的实验都有巨大 CD47 汇：
- 抗 CD47 抗体被滴定 → 表观效力下降；
- 吞噬读数被 RBC 结合/溶血背景污染。
修复：结合实验用纯化 CD47（IgV）与 SIRPα；细胞实验彻底清洗效应细胞 + CD47 阴性对照证明特异性。
3. 陷阱二：低亲和动力学
- µM 级 KD + 快 on/off → 高密度表面引起再结合，让相互作用显得更紧；
- 修复：低密度捕获（Rmax ≤20 RU）、高流速、报告 KD + kon/koff；
- 聚集的 CD47 或 SIRPα-Fc 融合引入亲合性 → 假 nM，细胞上不可复现。COA 必须查 SEC，优先单体 ECD。
4. 陷阱三：SIRPα 异型
SIRPα 常见 variant（V1 与 V2）对 CD47 亲和力不同（文献报道），人群分布不同。临床相关程序必须知道试剂是哪个 allotype——以及你的抗体是否双阻断。
5. 实验设计汇总
| 环节 | 建议 |
|---|---|
| 结合 | 低密度 SPR/BLI；CD47 IgV vs SIRPα V1 ECD；报告 KD/kon/koff |
| 阻断 | 竞争 SPR（CD47+抗 CD47→SIRPα）与/或细胞吞噬 |
| 对照 | CD47 阴性细胞、isotype、SIRPα 阻断阳性对照 |
| QC | SEC 单体%、内毒素、与配对蛋白的 SPR KD、allotype 声明（V1/V2） |
6. 相关资源
- [CD47/SIRPα 配对产品](/pairs/cd47-sirpa)
- [CD47–SIRPα SPR 结合与阻断协议](/content/cd47-sirpa-spr-blocking)
下一步
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